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SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說明書
更新時間:2020-05-20 點擊量:1878

SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說明書

 

SDS-PAGE Gel Kit

SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

 

目錄號:K0022

 

 

組分說明及保存條件

 

Catalog no.

 

 

 

 

K0022

K0022A

 

Size

40-60塊膠

200-300塊膠

保存條件

30%Acr-Bis(29:1)

100 ml

500 ml

2-8ºC

分離膠緩沖液

100 ml

500 ml

2-8ºC

濃縮膠緩沖液

50 ml

250 ml

2-8ºC

APS(過硫酸銨)

0.5 g

2.5 g

2-8ºC

TEMED

1 ml

5 ml

2-8ºC,避光

 

 

本產品所提供的APS(過硫酸銨)為固體粉末,使用前加入雙蒸水溶解即配制10%APS溶液(0.5 g APS加5ml雙蒸水、2.5  g APS加25ml雙蒸水),將溶液分裝后置于-20℃保存,通常半年內有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。

 

 

            本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

 

 

產品簡介

 

  本產品包括SDS-PAGE凝膠制備所需全套試劑,只需自備蒸餾水,即可制備高質量

各種濃度的變性PAGE凝膠,方便、快捷。本試劑盒在分離膠緩沖液和濃縮膠緩沖液中

已加入10%SDS,使用時不用另外加入。

 

注意事項

 

1.  10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩(wěn)定,應盡量減少室溫存放時間,每

   次取用后立即放回冰箱,以防失效;若發(fā)現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用

   -20度保存的10%APS。

2.  PAGE凝膠的凝聚速度與溫度以及APS、TEMED的用量密切相關;在其它條件不變

   的情況下,可通過改變APS及TEMED的用量,控制PAGE凝膠的聚合速度,凝膠聚

   合過快不利于操作;附表中的 APS及TEMED量可供參考,應根據實際操作情況做

   適當的調整。

3.  在凝膠配制過程中,尤其是液體混勻步驟,應盡量避免氣泡的產生。

4.  在分離膠上層加蒸餾水時要小心操作,加水時速度不能太快。

5.  丙烯酰胺具有神經毒性,操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。

6.  本產品僅用于科研,不能用于人體實驗或人體治療。

 

操作步驟

 

根據目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度,膠濃度請參考附表1。

 I 灌制分離膠(各試劑使用量請參考附表3)

1.參照凝膠模具說明書,裝配好凝膠模具。

 

注:加入上層篩板有助于加樣時保持填料與樣品均勻接觸,是否加入上層篩板可根據實際情況選擇。

2.將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、分離膠緩沖液和雙蒸水在小燒杯或試管中混合。

3.加入10%APS和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡。

4.在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液(對于 mini-gel,凝膠液加至約距前玻璃板頂端

   1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可),然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5 cm的水層,

   使凝膠表面保持平整。

 

5.靜置30-60分鐘,待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面后,表面凝膠已聚合。

 

 II灌制濃縮膠(各試劑使用量請參考附表2)

1.去除覆蓋在分離膠上的水層。

2.將不同體積的30%Acr-Bis(29:1)、濃縮膠緩沖液和雙蒸水在一個小燒杯或試管中混合。

3.加入10%過硫酸銨和TEMED,輕輕攪拌使其混勻,避免產生氣泡。

4.將濃縮膠溶液加至分離膠的上面,直至凝膠溶液到達前玻璃板的頂端。

5.將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。

6.靜置10~20分鐘,等待濃縮膠聚合。

7.待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。

8.進行常規(guī)電泳操作。

 

附表

 

  附表1. SDS-PAGE分離膠的濃度與建議分離范圍         

SDS-PAGE分離膠濃度

建議分離范圍

6%膠

50-150 kD

8%膠

30-90 kD

10%膠

20-80 kD

12%膠

12-60 kD

15%膠

10-40 kD

 

 

    附表2.配制5%SDS-PAGE濃縮膠

凝膠體積

 

 

所需各組分體積(單位:ml)

10%APS

TEMED

 

雙蒸水

30%Acr-Bis(29:1)

濃縮膠緩沖液(4×)

 

 

2 ml

1.14

0.34

0.5

0.02

0.002

4 ml

2.28

0.68

1

0.04

0.004

6 ml

3.42

1.02

1.5

0.06

0.006

8 ml

4.56

1.36

2.0

0.08

0.008

                 

實驗代做服務:

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務

流式細胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

細胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實驗

microRNA測序

動物實驗

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實驗

 

免疫共沉淀

真核表達載體構建

染色質免疫沉淀CHIP

非標定量(Label-free)實驗

      

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