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酶聯(lián)免疫測定的干擾物質(zhì)
更新時間:2011-11-21 點擊量:1615

酶聯(lián)免疫測定的干擾物質(zhì)

 

內(nèi)源性物質(zhì)Boscato等指出,大約40%的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),影響測定結(jié)果。主要的內(nèi)源性干擾物質(zhì)有以下幾種。

 1類風(fēng)濕因子   人血清中的IGG型類風(fēng)濕因子(RF,可與ELISA系統(tǒng)中捕捉抗體與標(biāo)記二抗的Fc的段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽性。制造商采用F(ab)2替代完整的鼠IgG是的辦法。標(biāo)本預(yù)先用熱變性IgG(63℃、10min)的固相吸附劑處理,可以除去RF的干擾。將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效。

  2補體   補體經(jīng)典活化途徑從CIq開始,在固相一抗和標(biāo)記二抗的過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),FcCIq分子結(jié)合位點暴露出來,則CIq可將二者連結(jié)起來,造成假陽性。用EDTA稀釋標(biāo)本,亦可用56℃下30Min滅活補體的方法。

  為避免上述RF及補體的干擾,特別推薦禽類如雞、安,鵪鶉等的卵黃抗體,即IgY.它不激活哺乳動物的補體,不結(jié)合抗體分子的Fc,不與RF結(jié)合,從而避免假陽性。IgY也不結(jié)合哺乳動物細(xì)胞的Fc受體,為免疫組化提供方便。

   3)嗜異性抗體   人類血清中含有可與鼠等嚙類動物Igs結(jié)合的天然的嗜異性抗體,可將一抗和標(biāo)記二抗連接在一起,造成假陽性。在標(biāo)本稀釋中加入過量動物的Igs有效然而亦可因加入的鼠Igs用量不足或者是亞類不同而失敗。

4)醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Igs抗體  臨床上逐漸開展用鼠源性CD3等單抗治療疾病、用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),這些患者可能產(chǎn)生抗鼠抗體,而造成假陽性。此外,被鼠等嚙齒類動物咬傷后的患者體內(nèi),可有抗鼠Igs的抗體,這要靠了解病史。測定抗原時,在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Igs,可克服由此而產(chǎn)生的假陽性。      

 5)抗靶抗原的自身抗體   抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等的自身抗體,均可干擾抗原或抗體的測定結(jié)果,需要同時作抗原與抗體測定,有時自身抗體與待測靶抗原形成復(fù)合物,測定之前需要用理化方法解離后再測定。

  6)交叉反應(yīng)物質(zhì)   與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì),如類地谷新、類aFP樣物質(zhì)等,原來大都用多抗來測定抗原,這少數(shù)交叉抗原決定簇對測定結(jié)果的影響不大?,F(xiàn)在普遍用單抗測定,倘若這個決定簇正好是所用單抗對應(yīng)的靶決定簇,結(jié)果是不難相像的,會出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果。

其他物質(zhì):內(nèi)源性酶如堿性磷酸酶,過氧化物酶對二步夾心ELISA影響較少,主要干擾免疫組化的結(jié)果。而內(nèi)源性酶和底物,抑制酶活性的藥物等,對一步法ELISA干擾作用較明顯。此外,血清黏度過大、血脂過高、膽紅素、血紅蛋白等也有干擾作用。應(yīng)該特別指出的是,還有一些體內(nèi)天然存在的物質(zhì),可與靶抗原互相結(jié)合而引起靶抗原變構(gòu),如已證實膽紅素和2離脂肪酸可結(jié)合aFP分子而導(dǎo)致其分子變構(gòu),與aFP分子結(jié)合的單抗還有Ca依賴性的差別。這些因素都可能會干擾aFP的測定結(jié)果。所以,aFP定量、定性測定不但不同試劑盒之間定量測定值的可比性很差,而且同一試劑盒的室間、室內(nèi)測定值的變化也較大。此外還經(jīng)常發(fā)生假陽性與假陰性結(jié)果。

外源性物質(zhì)   采集血清標(biāo)本時,加入的抗凝劑,如肝素、EDTA以及快速分離血清的分離凝膠等,均有干擾作用。標(biāo)本儲存過程中的變化,如aFP可形成二聚體,影響定量測定。

測定試劑中含有酶抑制劑如Na3N,可抑制HRP活性。

除此之外,還有與操作人員的素質(zhì)有關(guān)的實驗誤差,隨機誤差等問題。

 

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